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微生物学分野では,特定属種の細菌を検出するにあたり [KYB] カヤバ ショック NEW SR SPECIAL フロント 1本 マークII GX81 88/08~93/05 HTWC 1G-FE ハードトップ/セダン [LG] 送料1000円(税別) ※北海道・沖縄・離島は送料別途,菌体内のrRNAを標的とした蛍光in situ ハイブリダイゼーション(Fluorescence in situ hybridization: FISH)法が普及しつつある(1).細菌の rRNA は,界,科,属 Kuhl Racing スイフトスポーツ ZC32S フロントグリル レギュラータイプ 素地,種等のレベルで共通な塩基配列をその中に含んでおり,分類・同定にはその塩基配列がよく利用される. またrRNAは細胞内含量が高いため,FISHの標的として一般的に用いられている.

本方法は細菌のrRNAの塩基配列に特異的な蛍光標識オリゴヌクレオチドプローブを細胞内でハイブリダイズさせ,その蛍光を蛍光顕微鏡 下で検出・計数する ものである.

蛍光色素で標識したプローブとハイブリダイズした細菌は Dimotiv ディモーティヴ ガード・スライダー フェアリングガードロールタイプ(Fairing Guard - Roll) カラー:Black ER-6N,励起光を照射すると色素由来の蛍光を発する.



FISH 法の検出感度は主として細胞内の rRNA 含量に依存することから,貧栄養な環境下に生息する rRNA 含量が少ない細菌に対しては,十分な蛍光強度が得られずその適用が制限される場合がある.したがってより強い蛍光が得られる色素を選択することが重要であ り,現在 Cy3,Cy5等がプローブの標識によく利用されている.また蛍光シグナルを増強させる手段として,

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,プローブに酵素を結合させ,酵素反応を利用して蛍光を 増幅させる方法がある(2,3,4).さらに,DVC 法と組み合わせた DVC-FISH 法(DVC-FISH法の項を参照)や細胞内で遺伝子増幅する各手法(細胞内遺伝子増幅法の項を参照)を用いることで検出感度が向上する.また,生理活性 をもつ細菌を検出する各手法とFISH法とを組み合わせることにより,従来の平板培養法を用 いることなく,生理活性をもつ特定細菌種を検出することができる.その一例として サマータイヤ 225/45R18 95Y XL ハンコック ベンタス V12evo2 K120 エコフォルム CRS161 7.5-18 タイヤホイール4本セット,呼吸能の指標となるCTC法,増殖能の指標となるマイクロコロニー法, 基質の代謝能の指標となるマイクロオートラジオグラフィー法とFISH法との組み合わせが挙げられる(5).

FISH法は,従来スライドガラス上で行われていたが,河川や湖沼,海洋,地下水などの自然環境,また医薬品製造用水等の菌数の少ない 水試料に対しては , フィルター上に細菌を濃縮し GOODYEAR EAGLE REVSPEC RS-02 205/55R16 (グッドイヤー イーグル レヴスペック RS-02) 国産 新品タイヤ 4本価格,各反応を行うことができる(6, 7,

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,8).

【参考文献】

  1. Amann, R. I., W. Ludwig, and K.-H. Schleifer. 1995. Phylogenetic identification and in situ detection of individual microbial cells without cultivation. Microbiol. Rev. 59: 143-169.
  2. Yamaguchi N., S. Inaoka, K. Tani, T. Kenzaka, and M. Nasu. 1996. Detection of specific bacterial cells with 2-hydroxy-3-naphthoic acid- 2'-phenylanilide phosphate and fast red TR in situ hybridization. Appl. Environ. Microbiol. 62: 275-278.
  3. Lebaron, P ., P. Catala, C. Fajon, F. Joux, J. Baudart, and L Bernard. 1997. A new sensitive, whole-cell hybridization technique for detection of bacteria involving a biotinylated oligonucleotide probe targeting rRNA and tyramide signal amplification. Appl. Environ. Microbiol. 63: 3274-3278.
  4. Kenzaka, T., N. Yamaguchi, K. Tani, and M. Nasu. 1998. rRNA-targeted fluorescent in situ hybridization analysis of bacterial community structure in river water. Microbiology 144: 2085-2093.
  5. Kitaguchi A, N. Yamaguchi, K. Tani, and M. Nasu. 2005. Enumeration of respiring Pseudomonas spp. in milk within 6 hours by fluorescence in situ hybridization following formazan reduction. 2005. Appl. Environ. Microbiol. 71: 2748-2752.
  6. Alfreider, A., J. Pernthaler, R. Amann, B. Sattler, F. O. Glockner, A. Wille, and R. Psenner. 1996. Community analysis of the bacterial assemblages in the winter cover and pelagic layers of a high mountain lake by in situ hybridization. Appl. Environ. Microbiol. 62: 2138-2144.
  7. Maruyama, A., and M. Sunamura. 2000. Simultaneous direct counting of total and specific microbial cells in seawater, using a deep-sea microbe as target. Appl. Environ. Microbiol. 66: 2211-2215.
  8. Kenzaka, T., N. Yamaguchi, B. Prapagdee, E. Mikami, and M. Nasu. 2001. Bacterial community composition and activity in urban rivers in Thailand and Malaysia. J. Health Sci. 47: 353-361.
    

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